生物、医药和医疗器械技术

本发明涉及碳酸酐酶IV在制备肺腺癌诊断制剂中的应用。发明通过对肺腺癌高通量转录组数据进行Meta分析，获得差异表达基因，运用分析工具对差异表达基因进行功能分析，进而筛选出候选基因，并运用经典分子生物方法验证了碳酸酐酶IV与肺腺癌的相关性，碳酸酐酶IV可用于制备肺腺癌辅助诊疗制剂，具有重要的临床应用价值。

碳酸酐酶(carbonic anhydrase，CA)是一类含锌的金属酶，其功能是催化二氧化碳的水合和碳酸的水解，对二氧化碳的运输、水电解质和pH平衡有重要的调节作用。目前至少已经发现15种不同类型的碳酸酐酶同工酶，其中碳酸酐酶III和IV的活性相对较强，碳酸酐酶IV主要存在于脂肪组织、肝脏、心肌和慢骨骼肌纤维中，其自身抗体已经分别在系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎和糖尿病人中被检测到，同时IV型抗碳酸酐酶抗体在肾脏疾病体液免疫方面的发生发展中起到了重要作用。

本发明首先分别提取了5例肺腺癌患病病人的癌组织和5例正常组织，对其总RNA的进行提取，设计了用于扩增CA4基因的2条引物SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，用于扩增内参基因β-actin的2条引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。制备了含有CA4基因序列的标准DNA模板，并进行了敏感性实验。进而，采用qRT-PCR的方法比较CA4基因在肺腺癌组织和正常组织中的表达水平。结果表明：qRT-PCR扩增结果稳定，其中CA4在正常组织中的表达水平明显高于肺腺癌癌组织，实验结果验证了生物信息学筛选结果。进一步，发明人在116例肺腺癌患病病人的癌组织及癌旁组织中检测CA4基因表达情况，结果显示115例肺腺癌患病病人的癌组织中CA4基因表达低于癌旁组织中的表达，检出准确率达99％，即CA4基因与肺腺癌具有很好的相关性，可用于制备肺腺癌辅助诊断或者预后制剂。