生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了一种检测人体疲劳状态的方法，属于一种用胶体金试纸检测唾液中疲劳标志物的方法，包括先用疲劳状态检测试纸检测高浓度的唾液待测液，如果疲劳状态检测试纸显示为重度疲劳，再在疲劳状态检测试纸上用低浓度的唾液待测液检测重度疲劳级别；本发明采用非侵入式的方式对人体疲劳状态进行检测，对被测者无创、无痛，无需依赖其他仪器设备、专业操作人员或特定场所，具有操作简单、方便快捷、检测成本低、结果准确直观的优点。

免疫层析胶体金技术是一种新型的诊断技术，具有快速简便、准确、结果直观等优点。免疫层析胶体金技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当抗原-抗体-胶体金颗粒复合物富集时，会形成肉眼可见的红色沉淀线。

胶体金检测试纸的金标垫上包被有一种抗体标记的胶体金颗粒(免疫胶体金)，并在反应膜上的检测线区域包被抗体，当样品中含有相应的特异性抗原时，便能够与胶体金标记的抗体相结合形成复合物，然后在反应膜上进行层析的过程中在检测线区域被抗体捕获，形成红色条带，表明检测结果为阳性。

胶体金检测试纸常见于血液和尿液样品的检测，很少用于人体唾液样品的检测。目前尚未见到用试纸检测人体疲劳状态的方法和技术，也没有关于核连蛋白2胶体金试纸或检测装置的报道。

由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：

本发明采用非侵入式的方式对人体疲劳状态进行检测，对被测者无创、无痛，无需依赖其他仪器设备、专业操作人员或特定场所，具有操作简单、方便快捷、检测成本低、结果准确直观的优点。

本发明检测样本为唾液，样本易得；唾液收集量为0.5～3mL即可进行检测，与用血液作为检测样本相比具有收集过程方便快捷，收集量小，对被测者无创、无痛并且短期内能反复检测的优点。唾液中的核连蛋白2含量与人体疲劳程度呈正相关，本发明对唾液中的核连蛋白2的最低检出量为5ng/ml，具有检出量低，检测方法灵敏准确的优点。唾液收集时先用生理盐水漱口三次，再用清水漱口三次，然后收集唾液，这大幅度减少了唾液中其他杂质对检测结果的干扰，此收集方法优于刷牙等其它收集方式。

本发明利用磷酸缓冲液预处理唾液样本，维持了唾液样本的稳定性，有利于后续的检测。人体唾液中的有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等，pH值为6～7，粘度比水大18～35倍。唾液与磷酸缓冲液体积比为2:1～7时，磷酸缓冲液不仅能起到缓冲作用，而且磷酸缓冲液环境更接近于体内环境，减小了对唾液中活性物质的损害，使唾液中各物质维持在正常有活力的状态，使后续检测结果更精确可靠。

本发明提供的复溶液、划膜液与样品垫预处理液配方，使疲劳检测试纸能够满足产品设计的性能指标要求，保证结果的准确性。复溶液的配方能防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀，对核连蛋白2单克隆抗体与胶体金溶液的结合过程起到了很好的保护作用，维持了胶体金溶液的稳定性；划膜液作为核连蛋白2单克隆抗体与羊抗鼠IgG多克隆抗体的稀释液，用于检测线与质控线的制备过程，划膜液中的BSA与聚乙二醇20000作为稳定剂保证了两种抗体的生物活性，使抗体能够迅速的捕捉到层析过程中的胶体金复合物，保证了检测试纸的灵敏度，进而提高了结果的准确性；样品垫由预处理液浸泡后干燥得到，预处理液的配方解决了唾液样本粘稠、含有多种干扰物质等阻碍因素的问题；此外，复溶液与划膜液中含有一定量的叠氮钠，叠氮钠有一定的防腐作用，可防止细菌增生，对抗体活性的维持起到促进作用，延长了试纸条的有效期。