利用[Co(NH3)6]3+-DNA共振光散射探针定量检测蛋白质的方法
本发明公开了一种利用[Co(NH3)6]3+-DNA(脱氧核糖核酸)共振光散射(RLS)探针定量检测蛋白质的方法。本发明利用[Co(NH3)6]3+-DNA复合物与蛋白质之间强的静电作用,引起蛋白质的共振光散射信号的强烈增强,来检测标准牛血清白蛋白(BSA)。在波长346.0nm处增强的共振光散射强度与BSA的浓度在0.05~1.2μg/mL范围内有良好的线性关系。本发明应用于人血清白蛋白等多种蛋白质的共振光散射响应值差别的比较,以及实际人血清样品中总蛋白含量的测定,均取得好的效果。方法灵敏度较高,准确可靠,检测体系简单,为定量检测痕量蛋白质建立了一种实用的新方法。
蛋白质是生物体内最重要的物质之一,是生命的物质基础。蛋白质种类及其含量的测定对于生化分析和疾病诊断具有十分重要的意义。目前,传统的蛋白质测定方法有吸光光度法(包括凯氏定氮法、双缩脲法和考马斯亮蓝法)和荧光光度法。其中吸光光度法主要缺点是灵敏度较低,不能用于分析蛋白质浓度较低的生物样品;荧光光度法仅限于具有荧光的体系,使其适用范围受到限制。还有出现的一些发明方法,如欧洲专利G01N33/68A12、美国专利US2010047913等,将液相层析和质谱联用,虽然提高了检测的灵敏度及准确性,但是由于设备昂贵、耗时较长、操作较复杂,限制了其使用。因此寻找新的蛋白质检测方法具有重要的意义。
本发明的有益效果是:利用[Co(NH3)6]3+-DNA-蛋白质体系产生共振光散射信号的强烈增强现象,用于定量检测不同样品中痕量蛋白质的含量,具有灵敏度高、准确可靠、经济实用等特点,能够广泛应用于蛋白质痕量定量检测领域,在农业质量检测、食品营养标准检测、临床医学、疾病诊断等领域具有应用价值。
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李艳坤
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