本申请涉及植物组织培养领域，公开了一种知母组织培养快繁的方法。本申请所述方法首次选择知母幼嫩花葶为知母组织培养较为理想的外植体材料，通过优化诱导愈伤组织、诱导不定芽以及生根阶段的培养基组成，使培养过程中出愈率达到66.67％并且具有较佳的愈伤质地，不定芽出芽率和生根率均达到100％并且具有较佳的出芽和生根效果，后续再生苗炼苗成活率为100％，同时全株药用有效成分含量得到明显提升，由此建立了有效的知母组织培养再生体系，为知母利用优良无性系进行快繁提供理论参考与技术补充。