生物、医药和医疗器械技术

本发明公开一种N‑聚糖修饰的胰高血糖素样肽‑1类似物及其制备方法和应用。本发明首先公开了N‑聚糖修饰的胰高血糖素样肽‑1类似物，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，且所述氨基酸序列的天冬酰胺残基上修饰N‑聚糖。本发明进一步公开了上述胰高血糖素样肽‑1类似物的制备方法及在治疗或预防糖尿病或肥胖的药物中的应用。本发明依据两步酶法对胰高血糖素样肽‑1类似物进行N‑糖基化修饰，将均一的糖链添加到GLP‑1类似物的多肽链上，得到N‑聚糖修饰的GLP‑1类似物，较天然GLP‑1二级结构没有发生改变，半衰期延长，蛋白水解稳定性增强，降低血糖的功效提高，在治疗或预防糖尿病和肥胖上具有很好的应用潜力。

胰高血糖素样肽‑1(GLP‑1)是一种多肽类激素，在2型糖尿病的治疗中是一种很有前途的治疗候选药物。GLP‑1可通过与GLP‑1受体(G蛋白偶联受体)结合产生生理效应，GLP‑1受体被激活后，导致循环腺苷单磷酸和细胞内钙水平快速升高，从而导致葡萄糖依赖性胰岛素释放，降低体内血糖。但由于其易被血清中的酶[以二肽基肽酶Ⅳ(DPP‑Ⅳ)为主]降解，导致其血清半衰期短(～2min)，限制了其在糖尿病治疗中的潜在应用(Ahrén,B.(2004)Enhancement or prolongation of GLP‑1activity as a strategy for treatment of type 2diabetes.Drug Discovery Today:Therapeutic Strategies 1,207‑212.)。

本发明依据两步酶法对胰高血糖素样肽‑1类似物进行N‑糖基化修饰(包括唾液酸Q469A化复杂型N‑聚糖和去唾液酸化复杂型N‑聚糖修饰)，通过转糖基酶ApNGT 和内切酶突变N180H
体EndoCC 的酶连效果，将均一的糖链添加到GLP‑1类似物的多肽链上，得到唾液酸化复杂型N‑聚糖修饰的GLP‑1类似物和去唾液酸化复杂型N‑聚糖修饰的GLP‑1类似物，较天然GLP‑1二级结构没有发生改变，半衰期延长，蛋白水解稳定性增强，降低血糖的功效提高，在治疗或预防糖尿病和肥胖上具有很好的应用潜力。