生物、医药和医疗器械技术

本发明公开了提高单链抗体酵母展示文库质量的起始载体，在含有Aga2p基因的酵母表面展示载体的Aga2p的C末端插入5’到3’方向依次排列的核糖体跳跃肽基因片段和筛选标记基因片段获得。并且公开了该起始载体的构建方法及应用。通过本发明起始载体可以在文库筛选前剔除含有内部终止密码子片段的载体，进而使完整的单链抗体更好地展示在细胞表面，减少不完整单链抗体对抗原抗体特异性结合的影响，提高筛选效率，有利于得到高特异性单链抗体。

优化起始载体设计：使用高效启动子和信号肽序列，确保单链抗体（scFv）在酵母细胞中高效表达和分泌。引入多克隆位点（MCS）和标签序列（如His-tag、FLAG-tag），便于后续筛选和纯化。

提高文库多样性：采用高效的DNA重组技术（如Gibson组装或Golden Gate克隆），确保文库的高多样性和低偏差。使用高保真DNA聚合酶，减少PCR引入的突变，维持文库的原始多样性。

在酵母表面展示系统pDJ21中双阳性比例占总体的5.3％，而采用本发明起始载体pDJ22构建的文库进行筛选，双阳性比例达到了10.1％。结果表明，基于本发明构建的起始载体系统，阳性率提高了近5％，更加有力的证明了本发明起始载体能够通过诱导极大地提高单链抗体库的质量，使完整的单链抗体更好地展示在细胞表面，减少了不完整单链抗体对抗原抗体特异性结合的影响，提高了筛选效率，有利于最终得到高特异性单链抗体。