生物、医药和医疗器械技术

本发明采用水提醇沉法制备猪苓粗多糖，通过Sevag法除蛋白后再次醇沉并通过透析和冷冻干燥制备精制猪苓多糖，通过凝胶渗透色谱（GPC，gel permeation chromatography）及HPLC法对精制猪苓 多糖的相对分子量分布、组成及含量进行研究。为简化猪苓多糖测量手段，使用硫酸-蒽酮分光光度法测猪苓颗粒中猪苓多糖含量，探讨了有关实验条件对测定结果的影响并与HPLC法测定结果做比较研究。 发明为验证精制猪苓多糖预防膀胱癌作用，以BBN联合糖精诱导制作雌性Fisher-344大鼠膀胱癌模型，以猪苓多糖干预，并采用猪苓多糖口服联合BCG膀胱灌注，观察猪苓多糖预防大鼠膀胱癌模型及BCG毒副作用。实验结果显示，猪苓多糖具有显著预防大鼠膀胱癌进程作用，并且猪苓多糖能预防卡介苗治疗大鼠膀胱癌毒副作用。专利为解决现有猪苓多糖剂型（猪苓多糖胶囊）生物利用度低的问题，通过正交实验，筛选出猪苓多糖最佳工艺为8% L-HPC，8% CMC-Na，5% PVPP和6% MCC，此工艺崩解时间为50s，硬度为4.3kg kg/cm2。本实验制得猪苓多糖分散片崩解迅速，制备工艺简单，适合工业生产，具有良好的应用前景。

本专利以精制猪苓多糖为原料制备猪苓多糖分散片，并将其应用于膀胱癌手术及化疗辅助用药，可有效预防膀胱癌复发，并减轻膀胱癌化疗毒副作用。预计本项目有效缓解膀胱癌患者痛苦，并可产生较大社会经济效益。

改善药物的生物利用度，以最小的剂量发挥最大药效，降低药物的毒副作用是研制分散片的目的[。我国研究的分散片品种不多，进入市场的更少。采用新型崩解剂和稀释剂照速崩制剂的设计思想制备出吸收快、生物利用度高的中药(速释)制剂，将对我国的中药研究和开发产生重大影响。目前并未见到猪苓多糖分散片及其制备的研究，也未见此方面专利面世，故而猪苓多糖分散片为新品种。 多 孔 菌 科 多 孔 菌 属 真 菌 猪 苓 （ Polyporus Umbellatus(Pers.)Fries）的干燥菌核为药用猪苓，猪苓中主要成分为猪苓多糖（polyporus polysaccharide，PPS，水溶性多聚糖聚6-支链β-1，3-葡萄聚糖），PPS为生物活性多糖，可增强机体免疫功能，为一种极有潜力的免疫增强剂，聂红等证实猪苓多糖单、方剂对环磷酰胺小鼠淋巴细胞转化能力、NK细胞杀伤活性、T细胞总数和IgG产生能力均有所回升，可使小鼠免疫功能处于上调状态。张俊才等研究证实PPS能够增强豚鼠体液免疫和细胞免疫应答，为一种极有潜力的免疫增强剂。侯敢等发现PPS能诱导巨噬细胞iNOS合成，促进巨噬细胞NO的合成。 研究还证实PPS对人膀胱癌细胞株T24细胞的有抑制作用，表现在对细胞增生物质的抑制，阻止S期细胞进入G2／M期，同时PPS还能使T24细胞形态改变，细胞增殖减慢，贴壁细胞减少，死细胞增多 ，发现PPS的抗肿瘤作用与其促进巨噬细胞释放NO有关，并且同时使用rBCG-IL-2和PPS对巨噬细胞的刺激作用，比单独使用rBCG-IL-2的刺激作用强，发现猪苓多糖联合应用卡介苗能增强巨噬细胞CD11b、CD18及协同刺激分子表达的提高，发现PPS协同BCG作用初期能促进巨噬细胞表面CD14、TLR2和TLR4分子，及黏附分子CD11b 表达增加，故TLR 分子及信号通路可能作为主要途径之一介导PPS 和BCG 启动机体免疫进而引发抗肿瘤效应，还发现rBCG 能够直接进入T24 细胞细胞质中，而PPS 具有促进rBCG 从肿瘤细胞细胞质向细胞核转移的作用。猪苓多糖体外应用于小鼠膀胱癌细胞T739，可通过降低IKBKB基因表达激活Toll信号通路相关基因抑制膀胱癌细胞增殖，以上说明PPS对实验性膀胱肿瘤的抑制作用可能与其增强动物的免疫系统功能密切相关